對(duì)于研究細(xì)胞的科學(xué)人士來說,血清都不會(huì)陌生,其中胎牛血清是實(shí)驗(yàn)操作的常客。一般而言,胎牛血清是指懷孕5-8個(gè)月的母牛被屠宰后,發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺采血后,通過一系列工藝處理最終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育完全這些因子自動(dòng)消失。
通常細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)需要加入血清,以維持細(xì)胞的生長(zhǎng)和存活。而除了血清之外,部分細(xì)胞在培養(yǎng)過程中需要添加胰島素和β-巰基乙醇(β-mercaptoethanol )等成分來維持細(xì)胞狀態(tài)。MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素,而Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞則需要添加β-巰基乙醇,不同細(xì)胞加入量會(huì)有差異,需根據(jù)細(xì)胞類型判斷。
EMSA 主要基于蛋白-探針復(fù)合物在在凝膠電泳過程中遷移較慢的原理。根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)特異性和非特異性探針,當(dāng)核酸探針與樣本蛋白混合孵育時(shí),樣本中可以與核酸探針結(jié)合的蛋白質(zhì)與探針形成蛋白-探針復(fù)合物;這種復(fù)合物由于分子量大,在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳時(shí)遷移較慢,而沒有結(jié)合蛋白的探針則較快;孵育的樣本在進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳并轉(zhuǎn)膜后,蛋白-探針復(fù)合物會(huì)在膜靠前的位置形成一條帶,說明有蛋白與目標(biāo)探針有互作。
抗體保存得當(dāng)與否,直接決定了抗體的活性和使用效果!如果抗體保存得當(dāng),大部分抗體活性都可以維持?jǐn)?shù)月甚至數(shù)年。以abcam 抗體保存方法為主,同樣也可以應(yīng)用到其他絕大部分的抗體產(chǎn)品!
電泳過程至關(guān)重要,稍有不慎我們就只能對(duì)著 「微笑線」和 「皺眉線」 嘆氣,而質(zhì)量好的電泳能讓目的條帶整齊,結(jié)果圖讓人眼前一亮。電泳的支持介質(zhì)為聚丙烯酰胺凝膠,該凝膠的聚合則由丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺單體在自由基的催化下完成。
細(xì)胞爬片是一種將細(xì)胞培養(yǎng)在玻璃或塑料表面上,使其附著并擴(kuò)展的技術(shù)。這種技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、細(xì)胞-細(xì)胞相互作用等。我們?cè)谧雒庖邿晒猓↖F),激光共聚焦(Confocal),凋亡檢測(cè)(TUNEL)時(shí),免不了要制備細(xì)胞爬片,爬片質(zhì)量完全決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性。