質(zhì)粒具有穩(wěn)定可靠和操作簡便的優(yōu)點。如果要克隆較小的DNA 片段( <10kb) 且結(jié)構(gòu)簡單,質(zhì)粒要比其它任何載體都要好。在質(zhì)粒載體上進行克隆,從原理上說是很簡單的,先用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA 和目的DNA 片段,然后體外使兩者相連接,再用所得到重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細菌,即可完成。但在實際工作中,如何區(qū)分插入有外源DNA 的重組質(zhì)粒和無插入而自身環(huán)化的載體分子是較為困難的。
輔酶盡管不同于酶的底物,但在作用方式上和底物類似,在酶反應過程中與酶結(jié)合、分離及反復循環(huán)。輔酶用量的確定可將它們按底物處理。例如乳酸脫氫酶中輔酶按雙底物動力學方程計算。
血清并不是生來就為養(yǎng)細胞而來的。血清是全血的一部分,組分很復雜,有 150 多種已知組分組分,多種未知組分。這些組分中,有些對細胞生長是有利的,有些對細胞生長是無作用的,有些對細胞生長反而是有害的。
微生物的培養(yǎng)基通常指人工配制的適合微生物生長繁殖,或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。廣義上說,凡是支持微生物生長繁殖的介質(zhì)或材料,均可作為微生物的培養(yǎng)基。一個適當?shù)呐囵B(yǎng)基配方,對發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量有著極大的影響。
瞬時轉(zhuǎn)染:外源片段的表達時間短暫。這主要是因為外源導入的裸露的載體整合入基因組的幾率非常低,所以以染色體外(episomal)形式存在,不能隨細胞分裂而一同復制導致最后拷貝數(shù)被稀釋導致的。而且考慮到細胞分裂會稀釋質(zhì)粒的量,所以起初轉(zhuǎn)染的質(zhì)??截悢?shù)極高。這就導致瞬時轉(zhuǎn)染呈現(xiàn)一個高拷貝到低拷貝迅速降低的過程,且無法在這個系統(tǒng)上實現(xiàn)可誘導表達。
在western blot 過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節(jié),然而就是這樣一個小細節(jié)對實驗結(jié)果有著不可忽視的作用。這個 Western Blot參照家族的一員的作用主要是用來指示蛋白條帶所對應的分子量大小,只有標準量精確無誤了,實驗結(jié)果才有說服力,除此之外,蛋白標準還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用,所以選擇正確的蛋白Marker也是western blot實驗成功的必要條件之一。
標準物質(zhì):具有一種或多種足夠均勻和很好地確定了的特性值,用以校準設備,評價 測量方法或給材料賦值的材料或物質(zhì)。標準物質(zhì)是一種計量標準, 都具有標準物質(zhì)證書, 對每個標準值都具有給定置信水平的不確定度。
有些標準品非常昂貴,廠商只能以非常小的包裝提供給客戶,如1mg5mg10mg等,拿到產(chǎn)品時可能會覺得瓶子是空的,這種情況是由于粉末狀的物質(zhì)會分散在瓶壁和蓋子上,而液體狀物質(zhì)會在瓶壁形成一層可能看不見的液層。
標準品:國家參考品由中國食品藥品檢定研究院負責組織制備、標定,并向國家藥品標準品委員會申報獲批。企業(yè)內(nèi)部標準品是由企業(yè)根據(jù)產(chǎn)品的特性研制用于滿足產(chǎn)品生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制、性能評估等,一般不需要注冊。