凡鹽析所獲得的粗制蛋白質(zhì)(鹽析得到的IgG)中均含有硫酸銨等鹽類,這類將影響以后的純化,所以純化前均應(yīng)除去,此過程稱為“脫鹽”(desalthing)。脫鹽常用透析法和凝膠過濾法,這兩種方法各有利弊。前者的優(yōu)點(diǎn)是透析后析品終體積較小,但所需時(shí)間較長,且鹽不易除盡;凝膠過濾法則能將鹽除盡,所需時(shí)間也短,但其凝膠過濾后樣品體積較大。所以,要根據(jù)具體情況選擇使用。前實(shí)驗(yàn)中樣品體積較小,凝膠達(dá)濾后樣品體積不會(huì)太增加,所以選用凝膠過濾法。
.血液保存液常用種類 配方可分為:ACD(A,枸櫞酸;C,枸櫞酸三鈉;D,葡萄糖)與CPD(C,枸櫞酸三鈉;P,磷酸鹽;D,葡萄糖及枸櫞酸)兩大類保存液。在CPD中加腺嘌呤即為CPDA-1。
對于有殘留限量的藥物,添加濃度為MRL及MRL上下各一個(gè)濃度;對于禁用藥物,添加濃度為定量限和2倍定量限,每個(gè)添加濃度至少測定5個(gè)平行樣,并至少進(jìn)行3批實(shí)驗(yàn)(不同檢測日期,不同標(biāo)準(zhǔn)曲線,不同批次試劑盒)。
引物的設(shè)計(jì)和選擇符合熒光PCR的探針并進(jìn)行設(shè)計(jì)對于實(shí)時(shí)熒光PCR尤其重要??梢哉f,不合理的設(shè)計(jì)意味著絕對的失敗。但是,好的設(shè)計(jì)并不等于好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,影響PCR和熒光PCR的因素非常多,下面擇其重要進(jìn)行介紹。
質(zhì)粒干粉是指利用細(xì)菌體內(nèi)大量生產(chǎn)的質(zhì)粒進(jìn)行篩選、培養(yǎng)、破碎和干燥后得到的干燥粉末狀物,常用于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)存儲和運(yùn)輸質(zhì)粒DNA。
所有采集到的植物樣品都需用布口袋裝好,附上相關(guān)信息標(biāo)簽,同時(shí)做好采樣記錄,對特殊情況更需詳細(xì)記錄備查。采樣后,需用鮮樣直接檢測的應(yīng)馬上送實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行處理和分析,當(dāng)天處理不完的應(yīng)暫時(shí)冷藏在冰箱里。其他樣品應(yīng)立即放在干燥通風(fēng)處晾干。
在凍干工藝方面,如果藥液厚度大于20mm,干燥時(shí)間延長,也會(huì)造成產(chǎn)品外觀不合格。另外,在開始凍結(jié)時(shí)降溫速度快,使制品形成細(xì)結(jié)晶,密度大,升華受到阻力較大,水分不易蒸發(fā)掉,制品會(huì)逐漸潮解致使體積收縮而造成外形不飽滿或形成團(tuán)狀。如果凍結(jié)速度過慢,冰晶成長時(shí)間較長,則易發(fā)生濃縮,致使藥物與溶劑分離、成品結(jié)構(gòu)不均勻。
凍存前一定要保證細(xì)胞狀態(tài)良好,細(xì)胞處于對數(shù)生長期,否則不管后面怎么處理,凍存后的細(xì)胞狀態(tài)必然有影響。若細(xì)胞密度偏高,培養(yǎng)基已經(jīng)略微變黃,細(xì)胞狀態(tài)正常,需要換液培養(yǎng)2h以上再凍存細(xì)胞;若已完全變黃,細(xì)胞死亡超過20%,需要傳代后再重新培養(yǎng)至狀態(tài)正常后再凍存細(xì)胞。
ATCC菌種可以采取一些方法進(jìn)行復(fù)蘇,從而激活它們的生長。一般在實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行,在操作過程中要按照嚴(yán)格的步驟進(jìn)行,確保菌種的有效存活率。
細(xì)胞培養(yǎng)作為很多實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ),在生物工程領(lǐng)域的重要性不言而喻?,F(xiàn)在,隨著昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(BEVS)的廣泛應(yīng)用,昆蟲細(xì)胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年,昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)起始,經(jīng)過一百多年的發(fā)展,已在細(xì)胞、分子、醫(yī)學(xué)等方向廣泛應(yīng)用。目前,常用于培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞以草地貪夜蛾細(xì)胞株Sf9和Sf21,以及粉紋夜蛾細(xì)胞株Tn5B1-4(商品名High Five)為主。