革蘭染色法是細(xì)菌學(xué)中最廣泛使用的一種鑒別染色法。1884 年 由丹麥醫(yī)師 Gram 創(chuàng)立。方法是先將細(xì)菌用結(jié)晶紫染色,加媒染劑(增加染料和 細(xì)胞的親和力)后,用脫色劑(酒精或丙酮)脫色,再用復(fù)染劑染色。如果細(xì)菌 不被脫色而保存原染液顏色者為革蘭陽性菌(G+);如被脫色,而染上復(fù)染液的顏 色者為革蘭陰性菌(G-)。此染色法可將所有具有細(xì)胞壁的細(xì)菌分為兩大類:革蘭 陽性菌和革蘭陰性菌。
盡管擴(kuò)增序列的殘留污染大部分是假陽性反應(yīng)的原因,樣品間的交叉污染也是原因之一。因此,不僅要在進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)是謹(jǐn)慎認(rèn)真,在樣品的收集、抽提和擴(kuò)增的所有環(huán)節(jié)都應(yīng)該注意
熒光定量PCR是實驗室中出鏡率非常高的一種技術(shù)手段。它通過在PCR體系中添加熒光基團(tuán)來顯示DNA產(chǎn)物的累積情況,從而達(dá)到對PCR過程進(jìn)行實時監(jiān)控的目的。并且可以通過數(shù)據(jù)分析計算出起始模板量,這就是“熒光定量”中“定量”一詞的來源。
RPMI-1640廣泛應(yīng)用于哺乳動物、特殊造血細(xì)胞、正?;驉盒栽錾陌准?xì)胞,雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng),是目前應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基。主要用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)。其它像K-562、HL-60、Jurkat、Daudi、IM-9等成淋巴細(xì)胞、T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞以及HCT-15上皮細(xì)胞等均可參考使用。
懸浮培養(yǎng)指的是一種在受到不斷攪動或搖動的液體培養(yǎng)基里,培養(yǎng)單細(xì)胞及小細(xì)胞團(tuán)的組織培養(yǎng)系統(tǒng)
流式細(xì)胞術(shù)(flowcytometry,F(xiàn)CM)是一種綜合應(yīng)用光學(xué)、機(jī)械學(xué)、流體力學(xué)、電子計算機(jī)、細(xì)胞生物學(xué)、分子免疫學(xué)等學(xué)科技術(shù),使被測溶液流經(jīng)測量區(qū)域,并逐一檢測其中每一個細(xì)胞的物理和化學(xué)特性,從而對高速流動的細(xì)胞或亞細(xì)胞進(jìn)行快速定量測定和分析的方法。
據(jù)研究表明,約98%的支原體存在于細(xì)胞表面和細(xì)胞間隙。支原體直徑約180~350nm,比細(xì)胞小很多,經(jīng)低速離心與細(xì)胞分離。通過反復(fù)懸浮沖洗、離心,加上使用我們的Zell Shield,即可在細(xì)胞培養(yǎng)四代以內(nèi)有效地祛除支原體。
醋酸鹽緩沖液(pH3.5)取醋酸銨25g,加水25ml溶解后,加7mol/L鹽酸溶液38ml,用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準(zhǔn)確調(diào)節(jié)PH值至3.5(電位滴定法),用水稀釋至100ml,即得。