染色時調節(jié)pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長,組織酸化而影響細胞核著色。因此,要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min,這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳,可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。
細胞死亡是所有生物的基本過程,通過不同的機制發(fā)生。程序性細胞死亡的三種主要類型是凋亡、焦亡和壞死,每一種途徑都使用復雜的分子和細胞機制。盡管每種途徑都有特定的機制和結果,但它們具有共同的組成部分和特征。
WB實驗中使用到的有三種抗體:一抗、二抗和內參抗體。一抗是唯一針對目標抗原的抗體,可以進行制備也可以購買現貨,難度系數較高;二抗直接買就OK,只是需要留意下種屬選擇;內參抗體必不可少,是WB實驗中的質控環(huán)節(jié)。
抗體和重組蛋白無論是保存還是運輸,請避免反復凍融。反復凍融,冰晶會破壞抗體和重組蛋白的空間結構,導致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構象改變,從而降低抗體的結合能力,也加快了抗體球蛋白和重組蛋白的降解速度??贵w和重組蛋白保存得當與否,直接決定了抗體和重組蛋白的活性使用效果,如果保存得當,抗體和重組蛋白活性大部分都可以維持數年。
PBS緩沖液是一種廣泛應用于生物化學實驗中的緩沖溶液,它的全稱是Phosphate Buffer Saline (PB),中文通常稱為"磷酸鹽緩沖鹽溶液"或者"磷酸鹽緩沖生理鹽水"。這種溶液之所以能夠保持穩(wěn)定的pH值,主要得益于其中的磷酸緩沖對(H2PO4-和HPO42-)。
白細胞介素,簡稱白介素,是指在白細胞或免疫細胞間相互作用的淋巴因子,它和血細胞生長因子同屬細胞因子。兩者相互協(xié)調,相互作用,共同完成造血和免疫調節(jié)功能。白細胞介素在傳遞信息,激活與調節(jié)免疫細胞,介導T、B細胞活化、增殖與分化及在炎癥反應中起重要作用。
流式細胞術廣泛應用于細胞表面和細胞內分子表達特征的分析,界定不同種類的細胞群,測定分離出的亞類純度,分析細胞的大小和總量,它可以同時分析單個細胞的多個參數。它主要用于檢測標記在抗體上的熒光強度,這些熒光抗體則可以檢測與特定細胞分子結合的蛋白或配體,如與 DNA 結合的溴化丙啶 (PI) 等。
當一瓶細胞裝滿后,進行正常處理。 將它均勻地吹進培養(yǎng)瓶中,然后鋪上6孔板,每孔2ml。 涂抹后,不用觀察直接用酒精棉擦拭,然后放入培養(yǎng)箱中。 稍微向左三圈,向右三圈,先三圈,然后三圈。基本上,24小時后,每個孔中的細胞將非常均勻。
在免疫組化反應中最重要,包括孵育時間和抗體濃度。一抗孵育溫度有幾種:4℃、室溫、37℃,其中4℃效果最佳;孵育時間:這與溫度、抗體濃度有關,一般37℃1-2h,而4℃過夜和從冰箱拿出后37℃復溫45min。具體條件還要摸索。