核糖核酸酶A(RNase A)來源于牛胰臟,是一種內(nèi)切核糖核酸酶,可特異攻擊RNA上嘧啶殘基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶與相鄰核苷酸形成的磷酸二酯鍵,反應(yīng)終產(chǎn)物是3’嘧啶核苷酸和末端帶3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。無輔助因子及二價(jià)陽離子存在時(shí),核糖核酸酶A的作用可以被胎盤RNA酶抑制劑(RNasin)或氧釩一核糖核苷復(fù)合物(vanadyl—ribonuclosidecomplex,VRC)所抑制。RNase A的反應(yīng)條件極廣,且極難失活。在低鹽濃度(0~100 mmol/l NaCl)下,RNase A切割單鏈和雙鏈RNA、DNA:RNA雜交體中的RNA;當(dāng)NaCl濃度為300 mmol/l?;蚋邥r(shí),RNase A就特異性切割單鏈RNA。去除反應(yīng)液中的RNase A,通常需要蛋白酶K處理、酚反復(fù)抽提和乙醇沉淀。
pH緩沖液是確保pH測(cè)量值精確的重要因素。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液用于校準(zhǔn)pH 傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質(zhì)加入緩沖液中,這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。
標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(RM)reference material(RM):是一種已經(jīng)確定了具有一個(gè)或多個(gè)足夠均勻的特性值的物質(zhì)或材料,作為分析測(cè)量行業(yè)中的"量具",在校準(zhǔn)測(cè)量?jī)x器和裝置、評(píng)價(jià)測(cè)量分析方法、測(cè)量物質(zhì)或材料特性值和考核分析人員的操作技術(shù)水平,以及在生產(chǎn)過程中產(chǎn)品的質(zhì)量控制等領(lǐng)域起著不可或缺的作用。
如果你的質(zhì)粒正好比較大,又沒有經(jīng)驗(yàn),選擇特別注明可以轉(zhuǎn)大質(zhì)粒的轉(zhuǎn)染試劑成功幾率會(huì)高一些。有的轉(zhuǎn)染試劑還會(huì)提供一些促進(jìn)DNA凝聚的成分,使得DNA形成轉(zhuǎn)染復(fù)合物時(shí)更致密一些,更容易轉(zhuǎn)染一些。純化質(zhì)粒的質(zhì)量也會(huì)影響轉(zhuǎn)染效率,一定要選擇高質(zhì)量的質(zhì)粒。
Trizol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。在樣品的裂解液或勻漿中,Trizol能保持RNA的完整性。加入氯/仿(CHCl3)后離心,樣品能分成水樣層和有機(jī)層。而RNA存在于水樣層中。在收集上面的水樣層后,RNA可以通過異丙醇沉淀的方法來還原。在除去水樣層之后,樣品中的核酸和蛋白也能相繼以沉淀的形式還原。乙醇沉淀能析出中間層的DNA,在有機(jī)層中加入異丙醇能析出有機(jī)層的蛋白。
生成沉淀法。例如NaCl 溶液里混有少量的MgCl2 雜質(zhì),可加入過量的NaOH 溶液,使Mg2+離子轉(zhuǎn)化為Mg(OH)2 沉淀(但引入新的雜質(zhì)OH–),過濾除去Mg(OH)
由于凝膠層析的分離原理是分子篩作用,它不象其它層析分離方式主要依賴于溶劑強(qiáng)度和選擇性的改變來進(jìn)行分離,在凝膠層析中流動(dòng)相只是起運(yùn)載工具的作用,一般不依賴于流動(dòng)相性質(zhì)和組成的改變來提高分辨率,改變洗脫液的主要目的是為了消除組分與固定相的吸附等相互作用,所以和其它層析方法相比,凝膠層析洗脫液的選擇不那么嚴(yán)格。