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原因：

1、引物特異性差

2、模板或引物濃度過高

3、酶量過多

4、Mg2+濃度偏高

5、退火溫度偏低

6、循環(huán)次數(shù)過多

對策：

1、重新設(shè)計引物或者使用巢式PCR

2、適當(dāng)降低模板或引物濃度

3、適當(dāng)減少酶量

4、降低鎂離子濃度

5、適當(dāng)提高退火溫度或使用二階段溫度法

6、減少循環(huán)次數(shù)