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發(fā)布日期:2024/3/14 9:07:00

支原體(Mycoplasma)是一種大小介于細菌和病毒之間(0.1 - 0.6μm),沒有細胞壁、并獨立生活原核生物,形態(tài)呈高度多形性,呈圓形、絲狀或梨形。由于支原體直徑較小,進行除菌過濾是,約1%的支原體可以直接穿過常規(guī)的0.22μm的微孔除菌濾膜,造成細胞的支原體污染。

 



支原體污染的來源包括:

(1)工作環(huán)境的污染,實驗器材帶來的污染;

(2)操作者本身的污染(一些支原體在人體是正常菌群);

(3)已受污染的培養(yǎng)基、血清,或用來制備細胞的原始組織或器官的污染;

(4)污染支原體的細胞造成的交叉污染。

目前,已發(fā)現(xiàn)的支原體品種有100多種,但根據(jù)國內(nèi)外相關(guān)研究發(fā)現(xiàn),大約有二十多種支原體能污染細胞,有的細胞株可以同時污染兩種以上的支原體。

以下13種支原體污染在全部支原體污染中所占比例超過99%。(1)M. orale、(2)M.Arginini、(3)M.Hyorhinis、(4)A.Laidlawii、(5)M.Fermentans、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)M. hominis、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis。其中尤其是前四種:M.orale(口腔支原體)、M.arginini(精氨酸支原體)、M.hyorhinis(豬鼻支原體)和A.laidlawii(萊氏無膽甾原體)所占污染比例超過95%,前8種占比超過98%。

支原體通常附著在細胞的表面,并影響其宿主細胞的生理、遺傳等多方面的正常功能,用這些污染后貌似正常的細胞做試驗或生產(chǎn),將會嚴重影響結(jié)果。

1、對細胞生長繁殖和形態(tài)的影響

細胞培養(yǎng)物被支原體污染后生長減慢,且產(chǎn)生細胞病變(cytopathic effect, CPE),表現(xiàn)為細胞體積增大,碎片增多,在細胞質(zhì)中產(chǎn)生一些顆粒;細胞內(nèi)病毒繁殖受阻,使細胞形成空斑。光鏡下形成不正常密度生長的單層,貼壁細胞形成“流沙樣”脫落、裂解。某些支原體可在侵入細胞8h使線粒體膨脹,繼而被破壞,細胞核萎縮呈空泡化,細胞微管解聚,培養(yǎng)瓶中細胞與細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積,細胞無法傳代,甚至整個細胞群體溶解。

2、對細胞代謝和功能的影響

有些被污染后的細胞,雖形態(tài)上變化不明顯,但培養(yǎng)液pH變化較大,更換培養(yǎng)液后幾小時就變酸,培養(yǎng)基中的必需氨基酸被消耗掉,如谷氨酸或核苷前體,改變細胞代謝。

支原體吸附在細胞表面,破壞細胞膜的完整性,影響細胞信號傳遞;消耗細胞的核苷庫,引起細胞染色體異常;發(fā)酵型支原體能迅速降解簡單糖類,代謝產(chǎn)生的酸能改變細胞的功能;利用精氨酸的支原體則發(fā)生精氨酸效應(yīng),從而影響蛋白質(zhì)和核酸的合成、導(dǎo)致細胞的分裂和生長受阻;引起細胞酶譜改變;由于支原體對細胞膜的吸附,干擾膜受體的功能,改變信號傳遞,破壞膜的完整性。在單克隆抗體制備中,骨髓瘤或雜交瘤細胞因支原體的污染而導(dǎo)致融合失敗或抗體分泌能力下降以至喪失。

3、引起染色體異常

改變?nèi)旧w組型,通??蓪?dǎo)致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少,出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等。

4、對免疫細胞產(chǎn)量的影響

支原體能影響巨噬細胞的活性,抑制干擾素的合成和降低其活性,加大了繼發(fā)感染其他細菌和病毒的幾率,同時,通過植物血凝素干擾淋巴細胞的刺激、分化。
 

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