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反轉(zhuǎn)錄PCR/熒光定量PCR

RT-PCR/Real time-PCR

RT-PCR 是將 RNA 的反轉(zhuǎn)錄（RT）和 cDNA 的擴(kuò)增（PCR）相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從 RNA 合成 cDNA，再以 cDNA 為模板，擴(kuò)增合成目的片段。熒光定量 PCR 是指在 PCR 反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)（如 SYBR 熒光染料），利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個 PCR 進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。

服務(wù)流程 

1. 從樣本中提取總 RNA 

2. 引物/探針設(shè)計及合成

3. 合成 cDNA 第一鏈

4. 以 cDNA 為模版，分別擴(kuò)增目的基因和內(nèi)參基因

5. 定性：PCR 產(chǎn)物的凝膠電泳和差異分析

熒光定量：構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)準(zhǔn)曲線，溶解曲線，擴(kuò)增曲線，計算各樣本的拷貝數(shù)。

備注：請?zhí)峁┳銐蛄康臉悠罚?/font>100mg 組織塊或 107 個細(xì)胞或 0.5ml 血清），動物組織、植物組織等取樣后需液氮速凍；細(xì)菌、細(xì)胞樣品需新鮮培養(yǎng)。