細(xì)胞培養(yǎng)作為很多實驗的基礎(chǔ)，在生物工程領(lǐng)域的重要性不言而喻?，F(xiàn)在，隨著昆蟲桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)（BEVS）的廣泛應(yīng)用，昆蟲細(xì)胞的體外培養(yǎng)也越來越受到重視。從1915年，昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)起始，經(jīng)過一百多年的發(fā)展，已在細(xì)胞、分子、醫(yī)學(xué)等方向廣泛應(yīng)用。目前，常用于培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞以草地貪夜蛾細(xì)胞株Sf9和Sf21，以及粉紋夜蛾細(xì)胞株Tn5B1-4（商品名High Five）為主。
下面遠(yuǎn)慕以Sf9為例，具體講解一下昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)的要點：
細(xì)胞基本信息：
Sf9昆蟲細(xì)胞系來自雌性草地貪夜蛾卵巢組織，是利用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行重組蛋白表達(dá)的合適宿主。雖然以往人們利用由培養(yǎng)瓶和含血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成的靜止培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)，但是一般而言昆蟲細(xì)胞并無貼壁依賴性，更適于進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。
細(xì)胞特性：
（1）細(xì)胞靜置培養(yǎng)時半貼壁生長，也可以使用搖瓶懸浮培養(yǎng)；
靜置培養(yǎng)時細(xì)胞會大量附著瓶底生長，呈半貼壁狀態(tài)，會有少部分細(xì)胞懸浮生長；搖瓶培養(yǎng)時可以很快適應(yīng)懸浮生長，呈單個或小聚團(tuán)懸浮生長。
（2）對溫度極為敏感；
細(xì)胞需盡量控制在26~28℃培養(yǎng)，以保證細(xì)胞生長狀態(tài)；若溫度低于26℃，細(xì)胞生長速度會變慢，但恢復(fù)溫度后生長速度會逐漸恢復(fù)，不會對細(xì)胞產(chǎn)生過大傷害；若溫度28℃~30℃，細(xì)胞生長嚴(yán)重受限；若溫度高于30℃，細(xì)胞將受到不可逆?zhèn)Γ词箿囟然謴?fù)也無法恢復(fù)正常生長狀態(tài)；同時注意使用的培養(yǎng)基、PBS及其他試劑應(yīng)保持室溫（最好26~28℃），另外盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)和時間。
（3）細(xì)胞可以適應(yīng)多種培養(yǎng)體系。
該細(xì)胞多用于真核細(xì)胞蛋白表達(dá)系統(tǒng)，因此針對該細(xì)胞有諸多培養(yǎng)體系，例如Grace's Insect Medium、SF900 II、TNM-FH、ESF921等培養(yǎng)體系，包括含血清的培養(yǎng)體系和不含血清的培養(yǎng)體系，可以根據(jù)自身實驗需要選擇逐步更換為合適的培養(yǎng)體系。
昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)注意事項：
昆蟲細(xì)胞傳代/凍存/復(fù)蘇的一般步驟與哺乳動物細(xì)胞相同，但有些關(guān)鍵點又有所不同。
（1）昆蟲細(xì)胞應(yīng)于28°C、非濕化環(huán)境中培養(yǎng)。培養(yǎng)昆蟲細(xì)胞時建議不要進(jìn)行CO2交換，所以培養(yǎng)瓶選擇密閉蓋；
（2）使用昆蟲細(xì)胞專用的培養(yǎng)基；
（3）貼壁昆蟲細(xì)胞：細(xì)胞密度低于匯合狀態(tài)的20%時，細(xì)胞生長會受到抑制。健康狀態(tài)最好的細(xì)胞是對數(shù)期收獲的細(xì)胞，故昆蟲細(xì)胞應(yīng)在對數(shù)期傳代。但是，如果培養(yǎng)的是強(qiáng)貼壁性昆蟲細(xì)胞，則應(yīng)在細(xì)胞達(dá)到匯合狀態(tài)或者剛剛開始從培養(yǎng)瓶底部脫離時進(jìn)行傳代，因為此時細(xì)胞容易脫離；
（4）某些昆蟲細(xì)胞系可能需要一定的過程來適應(yīng)懸浮培養(yǎng)。進(jìn)行細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時無需更換培養(yǎng)基。定期傳代時需要吸出細(xì)胞懸液，然后加入適量培養(yǎng)基，將細(xì)胞稀釋到適當(dāng)?shù)拿芏取Ｌ砑有迈r培養(yǎng)基后可使細(xì)胞營養(yǎng)素達(dá)到完全補(bǔ)充；
（5）貼壁昆蟲細(xì)胞在無血清培養(yǎng)條件下，昆蟲細(xì)胞與基質(zhì)貼附極為牢固，需要花費較大力氣才能使其脫落。要使細(xì)胞脫落，最佳的方法是蓋緊瓶蓋，并以瓶蓋朝上的方向抓住培養(yǎng)瓶，在臺面上以中等力量敲擊瓶底2~3次，這樣將會有足夠的細(xì)胞解離下來用于傳代。
注意：
千萬不要劇烈搖晃培養(yǎng)瓶，昆蟲細(xì)胞對吹打、氣泡等機(jī)械損傷非常敏感，若吹打力度過大、氣泡過多將嚴(yán)重影響細(xì)胞生長狀態(tài)，甚至造成細(xì)胞損傷。如有其他疑問您可通過添加下方微信公眾號與我們聯(lián)系，感謝您對遠(yuǎn)慕生物的支持！
